簡(jiǎn)要描述:SiHa 人子宮頸鱗癌細胞(Human Cervical Squamous Cell Carcinoma)收到細胞后,請檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損、干冰已完*揮發(fā)等問(wèn)題,請立即拍照,并即時(shí)聯(lián)系工作人員處理。
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SiHa 人子宮頸鱗癌細胞
(Human Cervical Squamous Cell Carcinoma)
SiHa 人子宮頸鱗癌細胞
一、T25 細胞收到后處理
1、觀(guān)察
細胞在培養瓶中培養至狀態(tài)良好后灌滿(mǎn)完*培養基并密封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞后,請
先打開(kāi)外包裝,及時(shí)核對培養瓶上標注的細胞名稱(chēng)是否與訂購的細胞名稱(chēng)一致,并仔細查看培養瓶是否有
破損或漏液等異常情況,如有破損或漏液等異常情況,請立即拍照,并聯(lián)系工作人員處理。
2、處理
(1)75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養瓶外部。
(2)待酒精揮發(fā)完*,在顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(40x,100x,200x,
各三張)。前三天的細胞照片為重要的售后依據,不提供照片默認收到時(shí)細胞狀態(tài)良好。
(3)不要打開(kāi)培養瓶蓋,將細胞放入培養箱中靜置 2-4 小時(shí)后再做處理,以穩定細胞狀態(tài)。
(4)查看細胞說(shuō)明書(shū),按照細胞說(shuō)明書(shū)中描述的培養參數進(jìn)行常規細胞培養操作(見(jiàn)“細胞說(shuō)明書(shū)"第一
頁(yè))。 ? 貼壁細胞
? 未超過(guò) 80%匯合度時(shí),將培養瓶中的完*培養基收集至 50mL 離心管中(對比培養使用),留大約
7mL 完*培養基在細胞培養瓶中,放入培養箱中繼續培養。
? 超過(guò) 80%匯合度時(shí),將培養瓶中的完*培養基收集至 50mL 離心管中(對比培養使用),根據情況進(jìn)
行傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。首*傳代,建議 1:2 進(jìn)行傳代(分兩個(gè) T25)。傳代時(shí)
建議一瓶用原瓶中的完*培養基,另外一瓶用自行配制的完*培養基,二者進(jìn)行對比培養。
? 若細胞貼壁不牢,在運輸過(guò)程中容易發(fā)生細胞脫落,這是正?,F象。請將培養瓶中所有培養液收集至
50mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,收集上清(對比培養使用),往細胞沉淀中加入胰,酶 1-2mL,
輕輕吹打,重懸,消化 1-2 分鐘后,加入 5mL 完*培養基終止消化。1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上
清,加入 1-2mL 完*培養基重懸細胞。然后按 1:2 的比例進(jìn)行傳代(分兩個(gè) T25),補充完*培養基
至 5-8mL/瓶,放入細胞培養箱中培養。 二、凍存細胞收到后處理
1、觀(guān)察
收到細胞后,請檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損、干冰已完*揮發(fā)等問(wèn)題,請立即
拍照,并聯(lián)系工作人員處理。
2、處理
(1)迅速將細胞取出轉移至液氮保存,建議盡早復蘇。
(2)復蘇第一管如有細胞活性問(wèn)題,請對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(40x,100x,200x,各三張),并及時(shí)
聯(lián)系工作人員處理,后續會(huì )有技術(shù)人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說(shuō)明:未與我方聯(lián)系擅自復蘇
第二管,出現問(wèn)題不予售后。
三、細胞復蘇
(1)確認水浴鍋已升溫至 37℃,取 5mL 預熱的完*培養基于 15mL 離心管中待用。
(2)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中
無(wú)結晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
(3)將凍存管中的細胞轉移至含 5mL 完*培養基的 15mL 離心管中,1000rpm 離心 5 分鐘。
(4)棄盡上清,細胞沉淀用 1-2mL 完*培養基重懸,接種至 T25 培養瓶,補充完*培養基至 5-8mL/瓶,
放入細胞培養箱中培養。
(5)貼壁 5 小時(shí)以上或次日,更換新鮮的完*培養基繼續培養。 四、細胞傳代
(1)細胞密度達 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。首先,棄去培養上清,用 PBS 漂洗細胞 1-2 次。
(2)加入 1-2mL 消化液,置于培養箱中消化適當時(shí)間,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部
分變圓并脫落,即消化完*,將細胞迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入與消化液等體積的含 10%血
清的完*培養基終止消化。
(3)輕輕吹打細胞,待細胞完*脫落后轉移至 15mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘。
(4)棄去上清液,然后按推薦比例進(jìn)行分瓶傳代(收到細胞后首*進(jìn)行傳代,推薦 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳
代),補充完*培養基至 5-8mL/瓶。
(5)放入細胞培養箱中繼續培養。 五、細胞凍存
(1)細胞生長(cháng)狀態(tài)良好,細胞密度達 80%-90%,即可進(jìn)行細胞凍存。首先,棄去培養上清,用 PBS 漂洗
細胞 1-2 次。
(2)加入 1-2mL 消化液,置于培養箱中消化適當時(shí)間,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部
分變圓并脫落,即消化完*,將細胞迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入與消化液等體積的含 10%血
清的完*培養基終止消化。
(3)輕輕吹打細胞,待細胞完*脫落后轉移至 15mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘。
(4)棄去上清液,往細胞沉淀中加入 1mL/支的立譜沃無(wú)血清凍存液(貨號:PZ110R),混勻后加入凍存
管中,并做好標記。
(5)將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可(如果追求更理想的細胞復蘇率,也可選擇使用程序降溫盒),
24 小時(shí)后轉入液氮中長(cháng)期儲存,并做好儲存記錄。